檢驗男人不孕的實驗室方法

  許多不孕不育癥的原因都是在男方的身上。而因為精子的問題造成不孕不育是其中常見的病因。抗精子抗體就是精子的一個“毒物”。他讓精子的質量變差,導致精子不能和卵子結合,孕育出生命。

  抗精子抗體與精子結合後,在補體參與下,可導致精子制動和死亡,利用臺盼藍或伊紅Y 等染料使死精子染色,間接驗證血清或分泌液中是否有制動精子的抗體存在。

  (一) 臺盼藍染色法

  【準備】

  (1) 待檢血清的分離和滅活補體。

  (2) AB血型人血清(補體)制備。

  (3) 2%臺盼藍液配制(用蒸餾水)。

  (4) 臺盼藍-生理鹽水溶液配制:取適量生理鹽水,加等體積2%臺盼藍水溶液,混勻即可。

  (5) 配制0.01 mol/L,pH 7.4 PBS溶液。

  【方法】

  (1) 取正常新鮮精液[精子濃度為(40~ 100)×106/mL]用pH7.4 PBS作1∶10稀釋,以500r/min 30min離心洗滌一次,棄去上清,沉渣用PBS調整精子濃度為100×106/mL 的精子懸液。

  (2) 在小試管內加入1滴待檢血清,1滴精子懸液和 2滴補體血清。置37℃ 孵育,並於30min、60min分別追加2滴補體血清,直至90min後加入 1滴臺盼藍生理鹽水溶液,繼續孵育 60min,取出小試管,以500r/min,30min離心,棄去上清,將沉渣塗片,待幹燥後鏡下觀察。以陰性血清作對照組,以同樣條件和方法處理

  (3) 計數:對照組:記錄數至100個無染色精子(活精子)時所需的總精子數(含100個無染色精子加一定數量染色的死精子)。實驗組:記錄對照組相應的總精子數,把其中所含的無染色精子(活精子)數作X。將100-X所得的數目,即為被檢血致死的精子數,這個數目稱為精子毒性指數(STI)。

  【判斷】

  STI>25時,P≤0.01,判為陽性。STI在 15~ 20之間,判為可疑。STI<15時,判為陰性。本法所得陽性率與精子制動試驗的陽性率較為一致。

  (二) 伊紅Y染色法

  【準備】

  (1) 用蒸餾水配制4% 伊紅 Y 染液。

  (2) 配制0.01mol/L,pH7.4 PBS溶液。

  【方法】

  (1) 取正常新鮮精液(精子濃度宜大於:60×106/mL),用pH 7.4的 PBS洗滌 3次,調整精子濃度為10×107/mL。

  (2) 取精子懸液16μL,移置載玻板的漆孔內,分別設2個測定和對照孔,另取待檢血清20μL,補體血清4μL 加入測定孔內,對照孔隻加待測血清不加補體,充分混勻。

  (3) 把玻板移入濕盒內,在37℃孵育30min,每孔加4%伊紅Y 4μL,加上蓋玻片使其作用 2min,進行鏡檢。

  【判斷】

  由於活精子不著色,死精子著染為紅色,計算200個精子中,死精子所占的百分數,減去對照組死精子的百分數,即為抗體殺滅精子的百分率。以殺滅精子≥10% 以上者為陽性。

`;Q

Leave a Reply

Your email address will not be published. Required fields are marked *